無細胞タンパク質合成｜分子生物学研究｜安定同位体試薬

無細胞タンパク質合成は、細胞抽出液にアミノ酸、目的タンパク質の遺伝子、エネルギー液を加え試験管内でタンパク質を合成する技術です。独立行政法人理化学研究所からライセンスを受けた高度な無細胞タンパク質合成技術を安定同位体標識用にキット化しました。タンパク質発現確認用キット「無細胞くんQuick」および安定同位体標識専用キット「無細胞くんSI」の2種類をラインナップしております。
独自の改良により同位体希釈が大幅に低減されており、高い標識効率のタンパク質を大量合成できます。

製品紹介
テクニカルサポート

大腸菌抽出液を用いたタンパク質発現確認用キットです。クイック液には非標識アミノ酸をはじめ、必要な成分が全て含まれておりますので、テンプレートDNAを添加して1時間インキュベートするだけで簡単にタンパク質を合成できます。

大腸菌抽出液を用いた安定同位体標識タンパク質発現専用キットです。透析膜に内液とテンプレートＤＮＡを添加し、外液に浸してインキュベートするだけで大量の安定同位体標識タンパク質を得ることができます（CATタンパク質最大合成量5mg/mL）。より大量のタンパク質が必要な場合には、複数のキットをまとめてスケールアップしてご使用下さい。

取扱説明書製品安全データシート（MSDS）	無細胞くんQuick：
	無細胞くんSI：
	コントロールDNA：
動画情報	無細胞くんQUICK(動画) 取扱説明書内の「タンパク質合成操作」について紹介しています。
	無細胞くんSI(動画) 取扱説明書内の「タンパク質合成操作」について紹介しています。
参考資料	無細胞くん：テンプレート用プラスミドDNA 作成例
	無細胞くん：テンプレート用プラスミドDNA 精製例
	無細胞くん：クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（CAT）の活性測定方法実験結果からCAT合成量を計算できます
参考文献	Kigawa T, et. al Cell-free Protein Synthesis Methods and Protocols (Spirin, A. S. & Swartz, J. R., eds.), 83-97 Matsuda T, et. al J Biomol NMR. 37 (3) 225-229, 2007 Seki E , et. al Anal Biochem. 377, 156-161, 2008 Yabuki T, et al J Struct Funct Genomics. 8(4), 173-191, 2007

FAQ

タンパク質が発現しない、または発現量が少ない。

（1）無細胞くんQuickの場合

考えられる要因	推奨する対策
キット性能の低下	(1) 製品ラベルに記載の使用期限内であることをご確認ください。 (2) 適正な温度で保管されていたかご確認ください。 (3) 使用期限内で適正に保管されていた場合は、弊社までお問い合わせください。
テンプレートDNAが不適切	テンプレートDNAの一次構造、配列及び濃度が適切かご確認ください。また、純度の低いDNAでは発現量が低下する場合があります。UV測定でご使用のテンプレートDNAの純度をご確認ください。一般的に吸光度比A260/A280≧1.8が高純度のDNAと言われております。再精製する場合は、市販の精製キットをご利用いただくか、フェノール・クロロホルム抽出、エタノール沈殿による精製処理を行ってください。
タンパク質の性質による問題	タンパク質によっては反応中に容易に分解や沈殿してしまう傾向のものがあります。可溶性を向上させるタグ配列の挿入で可溶性が向上する場合があります。発現領域や末端配列のアミノ酸組成によって発現量が大きく異なりますのでタンパク質に応じたコンストラクトの最適化を行ってください。

（2）無細胞くんSIの場合

考えられる要因	推奨する対策
キット性能の低下	(1) 製品ラベルに記載の使用期限内であることをご確認ください。 (2) 適正な温度で保管されていたかご確認ください。 (3) 使用期限内で適正に保管されていた場合は、弊社までお問い合わせください。
テンプレートDNAが不適切	(1) 発現確認を無細胞くんQuickで行ってください。 (2) テンプレートDNAの一次構造、配列及び濃度が適切かご確認ください。また、純度の低いDNAでは発現量が低下する場合があります。市販の精製キット等で再精製してください。 (3) 無細胞くんQuickで発現確認されたにも関わらず、無細胞くんSIで発現が確認されない場合は、弊社までお問い合わせください。
タンパク質の性質による問題	タンパク質によっては反応中に容易に分解や沈殿してしまう傾向のものがあります。4時間程度の短時間反応で回収し、発現量を再度ご確認ください。配列への変異導入やコンストラクトの再設計で改善される場合があります。

どのベクターを使用すれば良いかわからない。

Ｔ７プロモーター、ＲＢＳ、Ｔ７ターミネーター配列を持つＴ７ＲＮＡポリメラーゼでmRNAを転写可能な市販の発現ベクターがお使いいただけます。ただし、ベクターの種類により発現量が異なる場合もあります。また、コピー数の少ないプラスミドでは調製時の培養スケールが大きくなり、純度が低くなることが想定されますのでコピー数の多いものをお勧めいたします。サイズの大きなプラスミドでは、添加量を増やす必要があります。最適なプラスミドの濃度を決定するために添加量を変えて合成量をご確認ください。

直鎖状テンプレートＤＮＡの調製方法がわからない。

調整方法は次の参考文献に詳しく記載されています。恐れ入りますがご参照、ご確認願います。
Yabuki et al J Struct Funct Genomics 8(4) 173-191 2007

発現確認のためのSDS-PAGE用サンプル調製方法がわからない。

反応終了後の液①から5μLを0.6mLエッペンチューブに移します（Total）。
①を12000rpmで5分間遠心分離し、上清5μLを0.6mLエッペンチューブに移します（Sup）。
Total及びSupそれぞれにMilliQ水45μLと冷アセトン100μLを加え、氷上で5分程静置後、12000rpmで5分間遠心分離し、上清を捨てます。沈殿を乾固し、30μLのSDS-PAGEサンプルバッファーに溶解してSDS-PAGEに供します。

医療分野をはじめ、多くの研究分野で注目されている安定同位体標識化合物を提供しています。

安定同位体試薬

安定同位体比質量分析計

FAQ

研究・開発

物性

用語一覧